Rilevatore ultravioletto DWD-1 (doppia lunghezza d'onda a doppio fascio ad alte prestazioni) elaborazione dei dati integrata

Gamma di lunghezze d'onda: 254nm, 280nm (rilevamento simultaneo), e due lunghezze d'onda opzionali tra le linee spettrali 254nm, 280nm-400nm.

Caratteristiche dello strumento DWD-1

Proteina 280nm/254nm doppia lunghezza d'onda:

Le molecole di proteine contengono aminoacidi aromatici come tirosina e trina a doppio legame coniugato. Possedono la proprietà di assorbire la luce ultravioletta, il picco di assorbimento è a 280 nm di lunghezza d'onda, e il valore della densità ottica del picco di assorbimento all'interno di questa lunghezza d'onda è proporzionale alla sua concentrazione, quindi può essere utilizzato come base per la determinazione qualitativa e quantitativa delle proteine, per questo motivo, l'assorbimento ultravioletto a 280 nm è generalmente utilizzato per il monitoraggio continuo della concentrazione di proteine ​​nel sistema di stratificazione. Ma poiché il contenuto di tirosina e tritina in varie proteine è diverso, per determinare con precisione la quantità, è necessario confrontare la proteina pura da misurare come criterio, o conoscere già il suo coefficiente di attenuazione come riferimento. Inoltre, molte sostanze non proteiche hanno anche una capacità di assorbimento determinata a una lunghezza d'onda di 280 nm e possono verificarsi interferenze. Gli effetti sono particolarmente gravi degli acidi nucleici (purine e pirimidine). L'assorbimento a 280nm è 10 volte più forte (per grammo) della proteina, ma l'assorbimento dell'acido nucleico è più forte a 254nm, con il suo picco di assorbimento vicino a 254nm. Il coefficiente di attenzione dell'acido nucleico a 254 nm è il doppio di quello a 280 nm.

Le proteine, invece, hanno un assorbimento ultravioletto di 280 nm superiore a quello di 254 nm.

Di solito：

Rapporto di assorbimento della luce per proteine pure: A280/A254" 1,8

Rapporto di assorbimento della luce dell'acido nucleico puro: A280/A254

Quindi, quando l'acido nucleico è presente contemporaneamente in una soluzione di proteina (come avviene nella maggior parte dei sistemi biologici), è necessario misurare simultaneamente l'OD254nm e l'OD280nm. Quindi il contenuto reale di proteine è calcolato sulla base del rapporto di assorbimento tra le due lunghezze d'onda, corretto attraverso una formula empirica per eliminare l'effetto dell'acido nucleico.

Concentrazione di proteine: 1,45 x A280-0,74 x A254 (mg/ml)

Questa formula empirica è stata stabilita da una serie di dati determinati da una miscela di proteine (enolazi del lievito) e nucleici (acido nucleico del lievito) in una percentuale nota di concentrazioni diverse.