La microscopia ottica a sezione sottile ha rapidamente guadagnato popolarità nell'imaging del volume a causa di tre caratteristiche chiave: in primo luogo, limitando l'eccitazione vicino al piano focale, il danno leggero è ridotto al minimo, ad esempio, il tempo di sopravvivenza biologica è più lungo. In secondo luogo, ottenendo buone sezioni ottiche, solitamente vicino alla microscopia confocale. In terzo luogo, la velocità di raccolta è molto veloce, diversi ordini di grandezza più veloce dei microscopi confocali tradizionali. Lo svantaggio principale di SPIM è che richiede componenti ottici aggiuntivi per generare il foglio luminoso. Il metodo più comune è quello di posizionare un obiettivo di illuminazione separato ortogonale all'obiettivo di rilevazione e posizionare il dispositivo ottico che produce la carta tra l'obiettivo di illuminazione e la sorgente laser. L'aggiunta di obiettivi aggiuntivi imporrà limiti di spazio al sistema di imaging e all'installazione del campione. Fondamentalmente, i microscopi devono essere progettati intorno al campione, quindi ci sono vari tipi di disegni di microscopi ottici, ognuno dei quali è più adatto per i diversi campioni e requisiti di installazione. Al contrario, i microscopi confocali o epifluorescenti tradizionali hanno un solo percorso ottico e possono ospitare una più ampia varietà di campioni. In altre parole, il vantaggio di SPIM è che viene a costo di una più stretta applicabilità per qualsiasi singolo strumento.

Posizionare due obiettivi ad angolo retto sopra il campione montato orizzontalmente in un piatto a coltura aperta, con ogni obiettivo ad angolo di 45 gradi rispetto alla direzione verticale. Crea un foglio luminoso da un obiettivo e immaginalo utilizzando un altro obiettivo. Raccogliere un mucchio di immagini spostando il foglio di luce attraverso il campione. Per alcune applicazioni, le informazioni 3D in un'unica vista o pila sono sufficienti (iSPIM). Per un sistema dual view, i due obiettivi agiscono in direzioni opposte per raccogliere un altro stack da una direzione verticale, e quindi i due dataset possono essere fusi computazionalmente per generare un dataset 3D con risoluzione isotropica (superando il problema delle differenze tipiche di risoluzione assiale per ottenere informazioni da altre viste). Pertanto, il diSPIM dual view ha due percorsi ottici (solitamente simmetrici), tra cui due scanner e due telecamere.
La "testa" diSPIM può essere installata su vari microscopi invertiti, compreso il telaio RAMM di ASI. Il sistema diSPIM può essere ottenuto da vari integratori di sistema. Sono disponibili vari pacchetti software open source e proprietari per la raccolta e l'elaborazione dei dati. Indipendentemente dall'integratore di sistema e dal software utilizzato, la maggior parte dell'hardware del microscopio sottostante è lo stesso.
La selezione di obiettivi diSPIM è limitata in quanto devono concentrarsi insieme senza scontrarsi tra loro. L'obiettivo più comunemente usato per diSPIM è un obiettivo ad immersione in acqua 40x con un NA di 0,8 (Nikon CFI Apo 40XW NIR). Obiettivo Olympus 20x/0.5 è un'altra possibilità. 1) Nikon 10x/0.3. ASI e Special Optics hanno sviluppato congiuntamente un obiettivo tissutale trasparente adatto a diSPIM, che può rappresentare tessuti trasparenti fino a 5 mm di profondità in forma piatta o in capsula sferica da 12 mm. I sistemi unilaterali (iSPIM) hanno una maggiore flessibilità in quanto l'obiettivo di illuminazione può essere un obiettivo WD lungo NA basso. Le telecamere SCMOS sono più comunemente utilizzate per l'imaging SPIM. Il sistema diSPIM è dotato di telecamere Hamamatsu Flash4, Andor Zyla, PCO Edge e Photometrics Prime 95B. ASI ha prodotto galvanometri 2D accoppiati a fibra compatta o "scanner", che sono componenti del sistema. La versione originale dello scanner crea un foglio luminoso scansionando rapidamente su un asse e spostando il foglio luminoso attraverso il campione 2) utilizzando un altro asse. Offriamo anche una versione scanner con lenti cilindriche per generare lastre luminose statiche. L'uscita del laser di eccitazione (o emissione laser) viene semplicemente immessa nello scanner. Utilizzare un interruttore ottico 2x1 o l'emissione laser a doppia uscita è molto utile, in modo che l'eccitazione possa essere completamente guidata allo scanner nel percorso ottico attivo.
Per applicazioni che richiedono il controllo ambientale, diSPIM può essere facilmente equipaggiato con un involucro termostatico e attrezzature appropriate per mantenere la sopravvivenza e la felicità dei campioni. Gli obiettivi inferiori (microscopi invertiti) in genere hanno obiettivi di ingrandimento più bassi e fotocamere più economiche per localizzare i campioni. È facile aggiungere illuminazione a goccia.

Come altre tecniche di imaging ottico, diSPIM illumina solo il piano focale, rendendolo una scelta ideale per l'imaging di cellule e organismi vivi, in quanto minimizza al massimo gli effetti fotosbiancanti e fototossici. Rispetto ai sistemi confocali tradizionali o rotanti a disco, la risoluzione assiale è stata aumentata di circa 2 volte, il fotosbiancamento è stato ridotto di più di 10 volte e la velocità è paragonabile a quella dei dischi rotanti. Visualizza un confronto più dettagliato con Confocal. Rispetto a molte altre implementazioni ottiche, il vantaggio principale di diSPIM è che, simile ai microscopi invertiti, l'installazione del campione è molto semplice. Il metodo più comune è quello di posizionare il campione su un vetro di copertura 24 x 50 mm, che è fissato in una camera speciale che può ospitare il mezzo di immersione. Altre lampade con installazione aperta non hanno risoluzione isotropica. Visualizza un confronto più dettagliato del metodo della pellicola luminosa. Oltre a facilitare il posizionamento del campione, la lente dell'obiettivo inferiore può essere utilizzata anche per la manipolazione della luce (compresa l'optogenetica) o altre tecniche sperimentali. Può anche essere utilizzato per fornire una terza visione indipendente del campione. Questa flessibilità è anche un vantaggio unico di diSPIM. DiSPIM è un microscopio modulare che consente molteplici variazioni e aggiunte in base alle vostre esigenze specifiche. Ricercatori NIH, strumentazione scientifica applicata e altri stanno esplorando varie nuove funzionalità e miglioramenti. Fare riferimento all'elenco parziale delle varianti. Il sistema diSPIM può essere acquistato da più integratori di sistema. Rispetto ad altre soluzioni commerciali di fogli leggeri, sono economici e flessibili. Rispetto ai sistemi SPIM/LSFM personalizzati, sono facili da ottenere, utilizzare e mantenere. Si prega di fare riferimento anche al confronto tecnico più completo della tecnologia SPIM.

ASI fornisce tutto l'hardware necessario per implementare diSPIM, un'implementazione flessibile e facile da usare del microscopio a illuminazione planare selettiva (SPIM) che consente la doppia visualizzazione (d) del campione quando installato capovolto (i). Microscopio. La "testa" diSPIM può essere installata su vari microscopi invertiti, compreso il telaio RAMM di ASI. ASI produce componenti optomeccanici, tra cui piattaforme elettriche, galvanometri 2D per la creazione e lo spostamento di fogli ottici e movimenti piezoelettrici delle lenti. Abbiamo bisogno di obiettivi, laser e telecamere per completare il sistema; Gli utenti possono acquistare altri articoli da soli, utilizzare i servizi di vari integratori di sistema che vendono diSPIM, o acquistarli tramite ASI. DiSPIM ha testato con successo le cellule coltivate sullo slip di copertura e incorporate nella cella c sul gel universitario. Embri di nematodi e zebrafish, così come molti altri campioni.